Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZC3H7A (h): sc-412020

Présentation

ZC3H7A (zinc finger CCCH-type containing 7A) code une protéine liant l’ARN, caractérisée par des motifs doigt de zinc de type CCCH, et intervient dans la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique. Elle a été impliquée dans la coordination de la stabilité et de la traduction des ARNm via des interactions avec des complexes ribonucléoprotéiques, contribuant ainsi au bon contrôle des programmes d’expression génique lors des réponses au stress cellulaire et de la prolifération. ZC3H7A a également été associée à des réseaux d’interaction virus–hôte, où la modulation du métabolisme de l’ARN peut influencer la signalisation de l’immunité innée et la réplication des agents pathogènes. Un traitement dérégulé de l’ARN et une traduction adaptative au stress sont des caractéristiques récurrentes des cancers et des troubles inflammatoires, faisant de ZC3H7A un nœud utile pour des études mécanistiques des voies de régulation centrées sur l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZC3H7A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZC3H7A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZC3H7A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZC3H7A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZC3H7A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZC3H7A pour l'étude de la signalisation de ZC3H7A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZC3H7A essentiels à la fonction de ZC3H7A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZC3H7A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZC3H7A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZC3H7A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZC3H7A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZC3H7A plasmide HDR (h) et le ZC3H7A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZC3H7A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZC3H7A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.