ZC3H14 Double Nickase Plasmid (m): sc-429118-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZC3H14 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZC3H14 Double-Nickase-Plasmid (m) und ZC3H14 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Zc3h14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZC3H14 Double Nickase Plasmid (m) | sc-429118-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Zc3h14** kodiert **ZC3H14**, ein RNA-bindendes Protein mit CCCH-Zinkfinger-Domäne, das an poly(A)-RNA assoziiert und die posttranskriptionelle Genregulation über Effekte auf die mRNA-Polyadenylierung, -Stabilität und -Translation steuert. ZC3H14 trägt zu RNA-Verarbeitungsprogrammen bei, die die Genexpression während der neuronalen Entwicklung und der synaptischen Funktion formen, und verknüpft es damit mit übergeordneten Wegen des mRNA-Stoffwechsels im Zellkern und Zytoplasma. Störungen von ZC3H14-Orthologen wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderter neuronaler Genexpression in Verbindung gebracht, wodurch dieser Faktor für mechanistische Studien der RNA-Regulation in hirnrelevanten Zelltypen bedeutsam ist. Als konservierter Regulator des mRNA-Schicksals wird ZC3H14 häufig in Modellen der neuronalen Differenzierung, der Dynamik von RNA-Granula und der transkriptomweiten Homöostase der poly(A)-Schwanzlänge untersucht.
ZC3H14 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Zc3h14-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Zc3h14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Zc3h14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Zc3h14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.