ZC3H14 Plasmide Double Nickase (m): sc-429118-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZC3H14 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZC3H14 Double Nickase Plasmid (m) e il ZC3H14 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Zc3h14. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZC3H14 Plasmide Double Nickase (m) | sc-429118-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Zc3h14 codifica ZC3H14, una proteina legante l’RNA con dita di zinco di tipo CCCH che si associa all’RNA poli(A) e regola il controllo genico post-trascrizionale attraverso effetti sulla poliadenilazione, la stabilità e la traduzione degli mRNA. ZC3H14 contribuisce a programmi di processamento dell’RNA che modellano l’espressione genica durante lo sviluppo neuronale e la funzione sinaptica, collegandola a vie più ampie del metabolismo dell’mRNA nel nucleo e nel citoplasma. L’alterazione degli ortologhi di ZC3H14 è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e a cambiamenti nell’espressione genica neuronale, rendendo questo fattore rilevante per studi meccanicistici della regolazione dell’RNA in tipi cellulari pertinenti al cervello. In quanto regolatore conservato del destino dell’mRNA, ZC3H14 è frequentemente studiata in modelli di differenziamento neuronale, dinamica dei granuli di RNA e omeostasi della lunghezza della coda poli(A) a livello di trascrittoma.
ZC3H14 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Zc3h14 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Zc3h14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Zc3h14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Zc3h14 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.