ZBTB5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432923

Übersicht

Zbtb5 kodiert ZBTB5, einen BTB/POZ- und C2H2-Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der sequenzspezifische DNA-Bindung und den Aufbau regulatorischer Komplexe zur Steuerung von Genexpressionsprogrammen unterstützt. In Mauszellen werden Faktoren der ZBTB-Familie häufig mit chromatinabhängiger Transkriptionsrepression oder einer kontextabhängigen Aktivierung durch Rekrutierung von Koregulatoren in Verbindung gebracht und prägen Prozesse wie Zellzyklusprogression, Linienfestlegung und zelluläre Differenzierung. Durch die Beeinflussung transkriptioneller Netzwerke, die Proliferation und Entwicklungszustand regulieren, ist ZBTB5 für mechanistische Studien zur fehlregulierten Gensteuerung relevant, wie sie bei onkogener Transformation und anderen transkriptionsassoziierten Pathologien beobachtet wird. Eine funktionelle Untersuchung von Zbtb5 kann aufklären, wie BTB–Zinkfinger-Proteine Promotor- und Enhancer-Aktivität integrieren, um nachgeschaltete Signalwege zu koordinieren.

Das ZBTB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zbtb5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zbtb5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zbtb5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZBTB5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zbtb5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZBTB5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zbtb5-Exone abzielen, die für die ZBTB5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zbtb5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZBTB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ZBTB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zbtb5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZBTB5 HDR-Plasmid (m) und ZBTB5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zbtb5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zbtb5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.