ZBTB5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411389

Übersicht

ZBTB5 (Zinkfinger- und BTB-Domäne enthaltend 5) kodiert einen BTB/POZ-Domänen-Transkriptionsfaktor, der über C2H2-Zinkfinger an DNA bindet und vermutlich als sequenzspezifischer Regulator der Genexpression wirkt, indem er Korepressor- und chromatinmodifizierende Komplexe rekrutiert. Durch die Beeinflussung von Transkriptionsprogrammen, die mit Zellzyklusprogression, Differenzierung und epigenetischem Zustand verknüpft sind, kann ZBTB5 linien-/gewebespezifische Gennetzwerke und die zelluläre Homöostase prägen. Eine fehlregulierte Expression oder veränderte Aktivität von BTB–Zinkfinger-Proteinen ist häufig mit onkogener Transkriptions-Neuprogrammierung und genomweiten Veränderungen der Chromatinzugänglichkeit assoziiert, was ZBTB5 zu einem hilfreichen Ziel für mechanistische Studien in der Krebs- und Proliferationsbiologie macht. In humanen Zellmodellen hilft die Perturbation von ZBTB5 zu untersuchen, wie Transkriptionsrepression/-aktivierung mit Chromatin-Remodeling, dem Timing der DNA-Replikation und Stressantwort-Signalwegen zusammenwirkt.

Das ZBTB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZBTB5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZBTB5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZBTB5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZBTB5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZBTB5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZBTB5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZBTB5-Exone abzielen, die für die ZBTB5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZBTB5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZBTB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZBTB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZBTB5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZBTB5 HDR-Plasmid (h) und ZBTB5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZBTB5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZBTB5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.