ZBTB5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411389

Panoramica

ZBTB5 (zinc finger and BTB domain containing 5) codifica un fattore di trascrizione con dominio BTB/POZ che si lega al DNA tramite dita di zinco C2H2 e si ritiene agisca come regolatore sequenza-specifico dell’espressione genica attraverso il reclutamento di complessi corepressori e di rimodellamento della cromatina. Influenzando programmi trascrizionali legati alla progressione del ciclo cellulare, alla differenziazione e allo stato epigenetico, ZBTB5 può modellare reti geniche specifiche di linea e l’omeostasi cellulare. Un’espressione deregolata o un’attività alterata delle proteine BTB–zinc finger è spesso associata a riprogrammazione trascrizionale oncogenica e a cambiamenti su scala genomica nell’accessibilità della cromatina, rendendo ZBTB5 un bersaglio utile per studi meccanicistici in ambito oncologico e nella biologia della proliferazione. Nei modelli cellulari umani, perturbare ZBTB5 aiuta a indagare come la repressione/attivazione trascrizionale si interfacci con il rimodellamento della cromatina, la tempistica di replicazione del DNA e le vie di risposta allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZBTB5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZBTB5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZBTB5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZBTB5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZBTB5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZBTB5 per lo studio della segnalazione di ZBTB5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZBTB5 critici per la funzione di ZBTB5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZBTB5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZBTB5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZBTB5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZBTB5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZBTB5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZBTB5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZBTB5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZBTB5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.