Plasmide CRISPR d'Activation (m) ZBP1: sc-425482-ACT

Le gène murin **Zbp1** code la **protéine 1 de liaison à l’ADN/ARN en conformation Z (ZBP1)**, un capteur cytosolique d’acides nucléiques inductible par les interférons, qui détecte les acides nucléiques en forme Z générés lors d’une infection virale ou d’un stress cellulaire. Une fois activée, ZBP1 met en jeu une signalisation dépendante des motifs RHIM avec **RIPK1/RIPK3** afin de coordonner des programmes transcriptionnels inflammatoires et des voies de mort cellulaire, notamment la **nécroptose** et l’**apoptose**, avec des effets en aval sur l’expression des gènes de l’immunité innée. Cet axe recoupe la signalisation des **interférons de type I**, l’activation de **NF‑κB** et des réponses associées à l’**inflammasome** qui façonnent la défense antivirale et l’inflammation tissulaire. Une activité dérégulée de ZBP1 a été impliquée dans des phénotypes inflammatoires et autoinflammatoires, une susceptibilité accrue aux infections et des pathologies d’origine immunitaire, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la détection innée des acides nucléiques et de la mort cellulaire régulée.

ZBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Zbp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Zbp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Zbp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Zbp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Zbp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.