ZBP1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-425482-ACT

マウスZbp1は、Z-DNA/RNA結合タンパク質1（ZBP1）をコードしており、ウイルス感染や細胞ストレス時に生成されるZ型核酸を検知する、インターフェロン誘導性の細胞質内核酸センサーです。活性化されると、ZBP1はRIPK1/RIPK3とのRHIM依存的シグナル伝達を介して、炎症性の転写プログラムおよびネクロプトーシスやアポトーシスを含む細胞死経路を協調的に制御し、その下流で自然免疫関連遺伝子の発現に影響を及ぼします。この軸はI型インターフェロンシグナル、NF-κBの活性化、ならびにインフラマソーム関連応答とも交差し、抗ウイルス防御と組織炎症の形成に関与します。ZBP1活性の制御異常は、炎症性／自己炎症性の表現型、感染感受性、免疫駆動性病態に関与することが示唆されており、自然免疫センシングと制御された細胞死の機序研究における有用な解析ノードとなっています。

ZBP1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Zbp1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZBP1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Zbp1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZbp1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZbp1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZbp1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。