ZAG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419279

Übersicht

Azgp1 kodiert das Zink-α2-Glykoprotein (ZAG), ein sezerniertes, adipokinähnliches Glykoprotein, das in mehreren Geweben exprimiert wird und zur systemischen Mobilisierung von Lipiden sowie zur Energiebilanz beiträgt. In metabolischen Netzwerken der Maus wurde ZAG mit der Regulation der Lipolyse in Adipozyten, der Modulation der Fettsäurenutzung und dem Crosstalk mit inflammatorischen Signalwegen in den Mikroumgebungen von Fettgewebe und Leber in Verbindung gebracht. Eine veränderte Azgp1-/ZAG-Expression wird häufig im Kontext adipositasassoziierter metabolischer Dysfunktion und veränderter Insulinsensitivität untersucht, ebenso wie im Zusammenhang mit breiteren, kachexie- und inflammationsbezogenen Phänotypen. Als zirkulierender und an die extrazelluläre Matrix assoziierter Faktor ist ZAG zudem für Untersuchungen zu Gewebeumbau und interzellulärer Kommunikation relevant.

Das ZAG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Azgp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Azgp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Azgp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZAG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Azgp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZAG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Azgp1-Exone abzielen, die für die ZAG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Azgp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZAG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ZAG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Azgp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZAG HDR-Plasmid (m) und ZAG HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Azgp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Azgp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.