ZADH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408358

Übersicht

ZADH2 (zinkbindendes Alkoholdehydrogenase-Domänen-enthaltendes Protein 2) kodiert eine mutmaßliche Oxidoreduktase mit einem alkoholdehydrogenaseähnlichen Zinkbindemotiv, was auf eine Rolle in der zellulären Redoxchemie und im Stoffwechsel hindeutet. Als Bestandteil einer breiteren Dehydrogenase/Reduktase-Landschaft dürfte ZADH2 cofactorabhängige enzymatische Prozesse beeinflussen, die mit Lipid- und Aldehydverarbeitung, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie der mitochondrialen oder zytosolischen metabolischen Homöostase verknüpft sind. Veränderungen in der Aktivität von Redox- und Stoffwechselenzymen stehen häufig mit veränderter Proliferation, Differenzierung und Stressanpassung in menschlichen Geweben in Zusammenhang, wodurch ZADH2 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien zur metabolischen Umprogrammierung und zur Kontrolle von Zellzuständen ist. Die fortlaufende Untersuchung von ZADH2-Expression und -Funktion in unterschiedlichen Gewebekontexten spricht dafür, es eher in der pfadorientierten Forschung als in einem einzelnen krankheitsspezifischen Modell einzusetzen.

Das ZADH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZADH2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZADH2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZADH2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZADH2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZADH2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZADH2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZADH2-Exone abzielen, die für die ZADH2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZADH2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZADH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZADH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZADH2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZADH2 HDR-Plasmid (h) und ZADH2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZADH2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZADH2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.