Plasmide Double Nickase (h) YB-1: sc-401385-NIC

YBX1 code pour la protéine 1 de liaison à la Y-box (YB‑1), un facteur multifonctionnel de liaison à l’ADN et à l’ARN qui coordonne la régulation transcriptionnelle, l’épissage des ARNm, leur stabilité et leur traduction. YB‑1 participe aux réponses cellulaires au stress et aux réseaux de transduction du signal, notamment des voies liées à l’activité MAPK/ERK et PI3K/AKT, et module l’expression de gènes impliqués dans la prolifération, la survie et la plasticité épithélio‑mésenchymateuse. Par ses rôles dans le contrôle transcriptionnel associé à la chromatine et au sein de complexes ribonucléoprotéiques, YB‑1 influence la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les programmes adaptatifs au stress. Une expression dérégulée de YBX1 ou la phosphorylation de YB‑1 a été associée à la biologie tumorale, à des phénotypes de résistance aux médicaments et à la signalisation inflammatoire, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques en cancérologie et en recherche sur le stress cellulaire.

YB-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus YBX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de YBX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de YBX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de YBX1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.