YAP Lentiviral Activation Particles (m): sc-423742-LAC

Das murine Yap1 kodiert den transkriptionellen Koaktivator YAP, einen zentralen Effektor des Hippo-Signalwegs, der mechanische Reize, Zellpolarität und die Aktivität upstream gelegener Kinasen integriert, um Proliferation, Überleben und die Kontrolle der Organgröße zu regulieren. Wenn die Hippo-Signalisierung abgeschwächt ist, akkumuliert YAP im Zellkern und bildet mit Transkriptionsfaktoren der TEAD-Familie Komplexe, um Genprogramme anzustoßen, die mit epithelial-mesenchymaler Transition, der Aufrechterhaltung von Stamm-/Vorläuferzellen und dem Umbau der extrazellulären Matrix verknüpft sind. Die YAP-Aktivität greift in Wnt/β-Catenin-, TGF-β/SMAD-, GPCR- und PI3K–AKT-Signalwege ein und formt kontextabhängige transkriptionelle Outputs in zahlreichen Geweben. Eine fehlregulierte YAP-Signalisierung wird in Modellen für Fibrose, Geweberegeneration und onkogene Transformation breit als mechanistische Achse genutzt, wodurch Yap1 einen besonders wertvollen Knotenpunkt für die Aufklärung von Signalwegen in der biomedizinischen Mausforschung darstellt.

YAP Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Yap1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

YAP Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Yap1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen YAP-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Yap1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.