Plásmido Doble Nickase (h) YAP: sc-400040-NIC

YAP1 codifica el coactivador transcripcional YAP, un efector central de la vía de señalización Hippo que integra la densidad celular, las señales mecánicas y la polaridad para controlar la proliferación, la apoptosis y el tamaño de los órganos. Cuando las quinasas de Hippo están inactivas, YAP se acumula en el núcleo y se asocia con factores de transcripción de la familia TEAD para regular programas génicos vinculados al crecimiento, la remodelación del citoesqueleto y la señalización de la matriz extracelular. La actividad desregulada de YAP se ha implicado en alteraciones de la inhibición por contacto, en la dinámica epitelio–mesénquima y en fenotipos similares a los de células madre, y se estudia con frecuencia en biología del cáncer, fibrosis y procesos regenerativos. YAP también interactúa con las vías de señalización de GPCR, Wnt/β-catenina y TGF-β, lo que convierte a YAP1 en un nodo útil para mapear la comunicación cruzada entre vías y la reorganización de redes transcripcionales.

YAP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus YAP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de YAP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de YAP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con YAP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.