XylT-II CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404853-ACT

Das humane Gen **XYLT2** kodiert die Xylosyltransferase II (XylT-II), eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die den initialen Transfer von Xylose auf spezifische Serinreste von Proteoglykan-Kernproteinen katalysiert und damit den Aufbau von Glykosaminoglykan-(GAG)-Ketten einleitet. Dieser frühe Schritt unterstützt die Organisation der extrazellulären Matrix und beeinflusst Signalwege, die mit Zelladhäsion, Mechanotransduktion und Wachstumsfaktor-Signalgebung verknüpft sind – vermittelt über Heparansulfat- sowie Chondroitin-/Dermatansulfat-Proteoglykane. Die Aktivität von **XYLT2** trägt somit zur Proteoglykan-Biosynthese und zu umfassenderen Glykosylierungsnetzwerken bei, die Gewebearchitektur und interzelluläre Kommunikation prägen. Genetische Störungen von Proteoglykan-Aufbauwegen unter Beteiligung von **XYLT2** wurden mit Bindegewebs- und Skelettphänotypen in Verbindung gebracht, wodurch das Gen für Studien zur Matrixbiologie und zu krankheitsrelevanten Mechanismen der Glykosylierung bedeutsam ist.

XylT-II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen XYLT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

XylT-II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des XYLT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der XYLT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen XylT-II-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native XYLT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von XylT-II-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des XylT-II-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem XYLT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.