Plásmido Doble Nickase (h) XPF: sc-401692-NIC

ERCC4 codifica la endonucleasa XPF específica de estructura, que forma un heterodímero con ERCC1 para catalizar incisiones 5′ en lesiones del ADN e intermediarios de ADN ramificado. Este complejo es esencial para la reparación por escisión de nucleótidos (NER) de aductos voluminosos, participa en la reparación de entrecruzamientos interhebra dentro de la red de anemia de Fanconi y contribuye al procesamiento de horquillas de replicación detenidas. La actividad de XPF ayuda a mantener la estabilidad del genoma al coordinar el reconocimiento de la lesión, la incisión y los pasos posteriores de síntesis de reparación. Los defectos en la función de ERCC4 se vinculan con respuestas deterioradas al daño del ADN y se asocian con sensibilidad a la radiación UV y fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y los trastornos hereditarios de reparación del ADN.

XPF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERCC4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERCC4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERCC4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERCC4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.