Plasmide Double Nickase (h) WTAP: sc-403767-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) WTAP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide WTAP Double Nickase (h) et le plasmide WTAP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant WTAP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: WTAP Antibody (D-7): sc-374280
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) WTAP | sc-403767-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) WTAP | sc-403767-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WTAP (Wilms tumor 1–associated protein) est un composant central du complexe « writer » de la N6‑méthyladénosine (m6A) des ARNm avec METTL3 et METTL14, coordonnant la méthylation co‑transcriptionnelle des ARN, laquelle influence l’épissage du pré‑ARNm, l’export nucléaire, la traduction et la stabilité des transcrits. En régulant des transcrits associés au cycle cellulaire et à la différenciation, WTAP contribue à des programmes de maturation des ARN qui façonnent la prolifération et les réponses au stress. Une expression dérégulée de WTAP ou une activité anormale de la voie m6A a été associée à des réseaux d’expression génique altérés dans de nombreux cancers et contextes développementaux, faisant de WTAP une cible largement étudiée du contrôle épitranscriptomique. La perturbation fonctionnelle de WTAP est donc utilisée pour explorer les mécanismes dépendants de la m6A qui gouvernent le devenir des transcrits et le phénotype cellulaire.
WTAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WTAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WTAP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WTAP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WTAP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.