Plasmide CRISPR/Cas9 KO WTAP (m): sc-425635

Présentation

Wtap code WTAP (Wilms tumor 1–associating protein), un composant régulateur central du complexe « writer » de la N6‑méthyladénosine (m6A) de l’ARNm, qui soutient l’activité catalytique de METTL3/METTL14 et coordonne la localisation nucléaire de la machinerie de méthylation. Par le contrôle, dépendant de la m6A, de la maturation du pré‑ARNm, de l’épissage alternatif, de la stabilité des transcrits et de la traduction, WTAP influence la progression du cycle cellulaire, la spécification des lignages et les programmes d’expression génique induits par le stress. L’activité de WTAP s’articule avec les voies du métabolisme de l’ARN au niveau des speckles nucléaires et relie la régulation épitranscriptomique aux réseaux de signalisation du développement et de différenciation. Une dérégulation du dépôt de m6A associé à WTAP a été impliquée dans des états de prolifération et de différenciation altérés, pertinents pour la biologie du cancer ainsi que pour des phénotypes hématopoïétiques et du développement dans des systèmes modèles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WTAP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Wtap dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Wtap, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Wtap à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WTAP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Wtap pour l'étude de la signalisation de WTAP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Wtap essentiels à la fonction de WTAP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Wtap pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WTAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le WTAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Wtap. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WTAP plasmide HDR (m) et le WTAP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Wtap pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Wtap définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.