WT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400095-ACT

WT1 (tumor de Wilms 1) codifica um fator de transcrição com dedos de zinco que regula decisões de destino celular durante o desenvolvimento embrionário e a homeostase tecidual, com papéis proeminentes na nefrogênese, no desenvolvimento gonadal e na diferenciação mesotelial. WT1 modula programas transcricionais que controlam proliferação, apoptose, transições epitélio–mesênquima e especificação de linhagem, interagindo com vias como Wnt/β-catenina, sinalização de TGF-β e redes responsivas a fatores de crescimento. Na biologia humana, a expressão alterada ou mutações em WT1 têm sido associadas a distúrbios do desenvolvimento e a diversos contextos de câncer, nos quais pode atuar, de modo dependente do contexto, como regulador transcricional de conjuntos gênicos oncogênicos ou supressores de tumor. Essas características tornam WT1 um nó útil para estudar o reprogramamento de redes transcricionais, trajetórias de diferenciação e regulação gênica responsiva ao estresse.

WT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WT1 em células tumorais com expressão de WT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.