WSTF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404237

Panoramica

BAZ1B codifica il fattore di trascrizione della sindrome di Williams (WSTF), una proteina regolatrice associata alla cromatina che funge da subunità centrale dei complessi di rimodellamento WICH e B‑WICH. WSTF coordina il rimodellamento dei nucleosomi con la replicazione e la riparazione del DNA, contribuendo alla stabilità del genoma attraverso la regolazione delle risposte allo stress replicativo e il recupero delle forcelle di replicazione bloccate. Possiede inoltre un’atipica attività tirosin-chinasica implicata nella segnalazione dipendente dalla fosforilazione a livello della cromatina, collegando il controllo trascrizionale alle vie di risposta al danno del DNA. Alterazioni del dosaggio di BAZ1B e programmi della cromatina mediati da WSTF deregolati sono stati associati a fenotipi di neurosviluppo e a difetti di trascrizione e riparazione rilevanti per il cancro, a supporto del suo studio nella regolazione epigenetica e nella biologia delle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WSTF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BAZ1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BAZ1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BAZ1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WSTF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BAZ1B per lo studio della segnalazione di WSTF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BAZ1B critici per la funzione di WSTF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BAZ1B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WSTF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal WSTF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BAZ1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WSTF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR WSTF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BAZ1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BAZ1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.