Wolframin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403869-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- WolframinO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Wolframin (h) e o Plasmídeo Double Nickase Wolframin (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para WFS1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Wolframin Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Wolframin Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O WFS1 codifica a wolframina, uma proteína de membrana do retículo endoplasmático (RE) com múltiplas passagens transmembrana que sustenta a homeostase do RE e protege as células contra a sinalização desadaptativa da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) durante stress secretório e metabólico. A wolframina participa em processos ligados ao manuseio de Ca²⁺ no RE, à proteostase e à comunicação entre vias de stress do RE e a função mitocondrial, influenciando a sobrevivência celular e a capacidade secretora de insulina. A desregulação de WFS1 está associada à síndrome de Wolfram e tem sido implicada em fenótipos mais amplos de neurodegeneração e relacionados com a diabetes, tornando-o um nó útil para o estudo de redes de sinalização responsivas ao stress. Em modelos de células humanas, a perturbação de WFS1 fornece uma leitura de marcadores de stress do RE/UPR, de sinalização dependente de cálcio e de efeitos a jusante no metabolismo e no destino celular.
Wolframin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus WFS1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de WFS1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função WFS1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com WFS1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.