Plasmide Double Nickase (m) Wnt-5a: sc-423718-NIC

Le gène murin **Wnt5a** code la glycoprotéine sécrétée **Wnt‑5a**, un ligand clé de la signalisation Wnt non canonique qui régule la polarité cellulaire, la migration dirigée et la morphogenèse tissulaire. Wnt‑5a transmet principalement son signal via les récepteurs **Frizzled** et **ROR** afin d’activer les voies de **polarité planaire** (PCP) et **Wnt/Ca2+**, modulant des effecteurs en aval tels que **JNK**, **PKC** et les petites **GTPases**. Par des interactions avec la signalisation dépendante de la **β‑caténine**, Wnt‑5a influence les programmes de différenciation, la dynamique du cytosquelette et la signalisation inflammatoire dans divers types cellulaires. Une activité dérégulée de Wnt5a a été associée à des anomalies du développement, à la fibrose et aux réponses de réparation des plaies, ainsi qu’à des rôles dépendants du contexte dans l’invasion tumorale et la biologie des métastases.

Wnt-5a Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Wnt5a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Wnt5a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Wnt5a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Wnt5a.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.