WIBG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409500

Übersicht

PYM1 kodiert das menschliche Protein WIBG, eine Komponente der Biologie von Messenger-Ribonukleoproteinen, die an der Koordination der posttranskriptionellen Genregulation beteiligt ist. WIBG wurde mit Prozessen des RNA-Stoffwechsels in Verbindung gebracht, die die Stabilität von Transkripten und deren Translation beeinflussen, und unterstützt damit die dynamische Kontrolle der Proteinproduktion in proliferierenden und differenzierenden Zellen. Über diese Funktionen ist WIBG mit Signalwegen verknüpft, die die Proteom-Homöostase und zelluläre Stressantworten steuern und in krankheitsrelevanten Kontexten häufig gestört sind. Eine Fehlregulation der mRNA-Prozessierung und Translation ist mit vielfältigen pathologischen Zuständen assoziiert, wodurch WIBG ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur Kontrolle der Genexpression darstellt.

Das WIBG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PYM1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PYM1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PYM1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WIBG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PYM1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WIBG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PYM1-Exone abzielen, die für die WIBG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PYM1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WIBG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom WIBG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PYM1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WIBG HDR-Plasmid (h) und WIBG HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PYM1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PYM1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.