WDR96 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407276

Übersicht

CFAP43 kodiert das menschliche WD-Repeat-haltige Protein WDR96, ein vermutlich als Gerüstprotein fungierendes Protein, das an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist und die Architektur von Zilien und Flagellen unterstützt. WD-Repeat-Proteine organisieren häufig Multiproteinkomplexe, die mikrotubulusbasierte Strukturen regulieren, und CFAP43 wurde mit Prozessen in Verbindung gebracht, die der Organisation des Axonems und der Funktion motiler Zilien zugrunde liegen. Störungen zilienassoziierter Komponenten können die Zellpolarität, die Wahrnehmung von Flüssigkeitsströmungen und intrazelluläre Signalwege beeinflussen, die am Zentrosom/Basalkörper koordiniert werden. Genetische Varianten in CFAP43 wurden mit Defekten der Spermienflagelle und männlichen Infertilitätsphänotypen assoziiert, was das Gen für Studien zu Ziliopathien und zur Reproduktionsbiologie relevant macht.

Das WDR96 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CFAP43-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CFAP43-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CFAP43 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WDR96-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CFAP43-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WDR96-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CFAP43-Exone abzielen, die für die WDR96-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CFAP43-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WDR96 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom WDR96 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CFAP43-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WDR96 HDR-Plasmid (h) und WDR96 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CFAP43-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CFAP43-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.