WDR96 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407276

Panoramica

CFAP43 codifica la proteina umana contenente ripetizioni WD WDR96, un’impalcatura (scaffold) prevista coinvolta in interazioni proteina–proteina che sostengono l’architettura di ciglia e flagelli. Le proteine a ripetizioni WD spesso organizzano complessi multiproteici che regolano strutture basate sui microtubuli, e CFAP43 è stata collegata a processi alla base dell’organizzazione dell’assonema e della funzione delle ciglia motili. L’alterazione di componenti associati alle ciglia può modificare la polarità cellulare, la percezione del flusso di fluidi e le vie di segnalazione intracellulare coordinate a livello del centrosoma/corpo basale. La variazione genetica in CFAP43 è stata associata a difetti del flagello spermatico e a fenotipi di infertilità maschile, rendendola rilevante per studi sulle ciliopatie e sulla biologia riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR96 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CFAP43 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CFAP43 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CFAP43 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WDR96.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CFAP43 per lo studio della segnalazione di WDR96, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CFAP43 critici per la funzione di WDR96
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CFAP43 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WDR96 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal WDR96 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CFAP43. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WDR96 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR WDR96 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CFAP43 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CFAP43 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.