WDR62 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410410-ACT

WDR62 codifica una proteina scaffold contenente ripetizioni WD che si localizza ai centrosomi e ai poli del fuso, coordinando l’organizzazione dei microtubuli e la progressione mitotica. È ampiamente implicata nella regolazione del ciclo cellulare, nella proliferazione dei progenitori neurali e nella segnalazione attivata dallo stress, con interazioni riportate in reti di chinasi mitotiche e in vie associate a JNK. Nella biologia umana, WDR62 è stata collegata a fenotipi di neurosviluppo e ad alterazioni della differenziazione neuronale, in linea con ruoli nella divisione simmetrica/asimmetrica e nello sviluppo corticale. La connettività delle sue vie di segnalazione la rende un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di stabilità del genoma, la funzione del centrosoma e il controllo proliferativo in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

WDR62 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WDR62 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WDR62 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WDR62 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WDR62, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WDR62. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WDR62 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WDR62 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WDR62 nelle cellule tumorali con espressione di WDR62 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.