WDR22 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435826

Descripción general

Dcaf5 codifica WDR22, una proteína con repeticiones WD implicada en la biología de la ligasa E3 de ubiquitina DDB1–CUL4, donde los adaptadores con repeticiones WD ayudan a conferir especificidad de sustrato para la proteostasis dependiente de ubiquitina. A través de estos complejos, WDR22 está en posición de influir en el recambio proteico regulado que coordina la progresión del ciclo celular, el control de calidad asociado a la replicación y reparación del ADN, y la señalización sensible al estrés. Las alteraciones en la dinámica de ubiquitinación son ampliamente relevantes para los mecanismos de inestabilidad genómica y proliferación desregulada, lo que convierte a Dcaf5/WDR22 en un punto de entrada útil para estudiar vías vinculadas a la transformación oncogénica y otros trastornos proliferativos en sistemas modelo. En el ratón, la perturbación genética de Dcaf5 puede ayudar a definir funciones específicas de tejido y contexto de las redes de ligasas de ubiquitina asociadas a DCAF.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO WDR22 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dcaf5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dcaf5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dcaf5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína WDR22.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dcaf5 para la investigación de la señalización de WDR22, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dcaf5 críticos para la función de WDR22
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dcaf5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido WDR22 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido WDR22 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dcaf5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR WDR22 (m) y el plásmido HDR WDR22 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dcaf5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dcaf5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.