Plasmide Double Nickase (h) VRK1: sc-404617-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) VRK1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide VRK1 Double Nickase (h) et le plasmide VRK1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VRK1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VRK1 Antibody (A-11): sc-271061
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) VRK1 | sc-404617-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) VRK1 | sc-404617-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La kinase 1 apparentée à la vaccine (Vaccinia-related kinase 1, VRK1) est une kinase sérine/thréonine qui se localise principalement dans le noyau et régule la dynamique de la chromatine, la progression du cycle cellulaire et les réponses aux dommages de l’ADN. VRK1 phosphoryle des substrats tels que l’histone H3 et p53, ce qui la relie à l’entrée en mitose, au contrôle transcriptionnel et aux voies de signalisation des points de contrôle qui préservent l’intégrité du génome. En modulant des processus associés à l’enveloppe nucléaire et à la chromatine, VRK1 contribue à coordonner la prolifération avec le stress de réplication et la réparation. Une activité ou une expression altérée de VRK1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuromusculaires, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte d’une croissance cellulaire aberrante et de la stabilité du génome.
VRK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VRK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VRK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VRK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VRK1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.