Partículas Lentivirales de Activación (h) VPS45: sc-411599-LAC

VPS45 codifica un regulador de la familia Sec1/Munc18 de la fusión de membranas dependiente de SNARE, esencial para el tráfico endosomal y el anclaje (tethering) de vesículas. En células humanas, VPS45 sostiene la función del endosoma temprano y las vías de reciclaje al coordinar los eventos de acoplamiento y fusión de vesículas que influyen en el recambio de receptores, la clasificación de la carga y la señalización posterior. La alteración de VPS45 perturba el transporte del endosoma a la membrana plasmática y la homeostasis endolisosomal, procesos vinculados a un funcionamiento deficiente de las células inmunitarias y a una proteostasis alterada. Estudios genéticos implican a VPS45 en trastornos congénitos con desregulación inmunitaria e inflamación, lo que subraya su relevancia para estudios mecanísticos del transporte intracelular en contextos de enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral VPS45 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de VPS45 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral VPS45 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción VPS45, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de VPS45. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo VPS45 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.