Plasmide Double Nickase (h) VPS33B: sc-406200-NIC

VPS33B code un composant central de la machinerie d’arrimage de classe HOPS/CORVET, qui coordonne la maturation des endosomes, l’amarrage des vésicules et la fusion membranaire dépendante des SNARE. En régulant le trafic endolysosomal et le tri polarisé, VPS33B assure l’acheminement correct des cargos vers les lysosomes ainsi que vers des voies de sécrétion spécialisées dans les cellules différenciées. Une altération de la fonction de VPS33B a été associée à des défauts de polarité épithéliale, de biogenèse des granules plaquettaires et de physiologie biliaire et rénale, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude de phénotypes multisystémiques cholestatiques et hémorragiques. Son rôle dans le transport vésiculaire recoupe également des voies qui contrôlent l’autophagie, le renouvellement des protéines membranaires et l’homéostasie des organites.

VPS33B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VPS33B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VPS33B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VPS33B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VPS33B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.