VpreB3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423685

Descripción general

Vpreb3 codifica VpreB3, una proteína relacionada con la cadena ligera sustituta que participa en el ensamblaje de inmunoglobulinas y en el control de calidad durante el desarrollo de las células B. En las células de la línea B en desarrollo, VpreB3 se asocia con la proteostasis del retículo endoplásmico y con el manejo de los componentes de la cadena ligera de las inmunoglobulinas, influyendo en la maduración del receptor pre-B y en la competencia de señalización aguas abajo. Una regulación alterada de esta vía puede afectar los estados de diferenciación de las células B, la formación del repertorio de anticuerpos y las respuestas de estrés celular vinculadas al procesamiento asociado al RE. Estas características hacen de Vpreb3 una diana útil para desentrañar los mecanismos de maduración de las células B y la biosíntesis de inmunoglobulinas en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VpreB3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vpreb3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vpreb3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vpreb3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VpreB3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vpreb3 para la investigación de la señalización de VpreB3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Vpreb3 críticos para la función de VpreB3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vpreb3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VpreB3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VpreB3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vpreb3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VpreB3 (m) y el plásmido HDR VpreB3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vpreb3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vpreb3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.