VpreB1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423683

Descripción general

Vpreb1 codifica VpreB1, un componente de la cadena ligera sustituta que se empareja con λ5 (IGLL1) y la cadena pesada μ de inmunoglobulina para formar el receptor de pre–células B (pre-BCR) durante la linfopoyesis B temprana en el ratón. La señalización del pre-BCR coordina la progresión de puntos de control desde los estadios pro–B a pre–B al promover la proliferación, imponer la exclusión alélica de la cadena pesada e iniciar la recombinación de la cadena ligera mediante vías que convergen con quinasas de la familia SRC, la señalización SYK/BTK y, aguas abajo, los programas PI3K–AKT y MAPK. La alteración de este eje perturba la dinámica del desarrollo de las células B, modifica la formación del repertorio y puede influir en la competencia inmunitaria y en los mecanismos de tolerancia. Dado que la función del pre-BCR está estrechamente ligada al control de los puntos de control del desarrollo, Vpreb1 se estudia con frecuencia en modelos de maduración anómala de células B y desregulación inmunitaria relevantes para la investigación hematológica y autoinmune.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VpreB1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vpreb1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vpreb1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vpreb1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VpreB1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vpreb1 para la investigación de la señalización de VpreB1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Vpreb1 críticos para la función de VpreB1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vpreb1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VpreB1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VpreB1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vpreb1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VpreB1 (m) y el plásmido HDR VpreB1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vpreb1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vpreb1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.