Partículas Lentivirales de Activación (h) von Willebrand Factor/VWF: sc-400217-LAC

VWF codifica el factor von Willebrand, una gran glucoproteína multimérica producida principalmente por células endoteliales y megacariocitos, que media la adhesión plaquetaria al colágeno subendotelial expuesto y estabiliza el factor VIII de la coagulación circulante. Se almacena en los cuerpos de Weibel–Palade y en los gránulos α plaquetarios, y se libera en respuesta a la lesión vascular, integrando el tráfico secretor endotelial, la mecanotransducción dependiente de la cizalladura y la hemostasia primaria. El ensamblaje de multímeros de VWF y su procesamiento proteolítico por ADAMTS13 regulan la formación del trombo y la permeabilidad microvascular bajo flujo de alta cizalladura. Las alteraciones en la abundancia de VWF o en la distribución de sus multímeros se asocian con la enfermedad de von Willebrand y otros fenotipos hemorrágicos o trombóticos, lo que lo convierte en un nodo clave para estudios de biología vascular y vías de la coagulación.

Las partículas de activación lentiviral von Willebrand Factor/VWF (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de VWF en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral von Willebrand Factor/VWF (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción VWF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de von Willebrand Factor/VWF. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo VWF y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.