von Willebrand Factor/VWF Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400217-LAC

VWF codifica il fattore di von Willebrand, una grande glicoproteina multimerica prodotta principalmente da cellule endoteliali e megacariociti, che media l’adesione piastrinica al collagene subendoteliale esposto e stabilizza il fattore della coagulazione VIII circolante. È immagazzinato nei corpi di Weibel–Palade e nei granuli α piastrinici e viene rilasciato in risposta a un danno vascolare, integrando il traffico secretorio endoteliale, la meccanotrasduzione dipendente dallo shear stress e l’emostasi primaria. L’assemblaggio dei multimeri di VWF e la loro processazione proteolitica da parte di ADAMTS13 regolano la formazione del trombo e la pervietà del microcircolo in condizioni di flusso ad alto shear. Alterazioni dell’abbondanza di VWF o della distribuzione dei suoi multimeri sono associate alla malattia di von Willebrand e ad altri fenotipi emorragici o trombotici, rendendolo un nodo chiave per lo studio della biologia vascolare e delle vie della coagulazione.

Le particelle di attivazione lentivirale von Willebrand Factor/VWF (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di VWF in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale von Willebrand Factor/VWF (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione VWF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di von Willebrand Factor/VWF. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo VWF e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.