Plásmido Doble Nickase (m) Von Hippel Lindau/VHL: sc-423671-NIC

El gen Vhl de ratón codifica el supresor tumoral von Hippel–Lindau (VHL), el componente de reconocimiento de sustrato de un complejo ligasa E3 de ubiquitina Cullin-2 que, en normoxia, dirige a HIF-α hidroxilado hacia la ubiquitinación y su degradación por el proteasoma. Mediante la regulación de la transcripción dependiente de HIF, VHL controla la detección celular de oxígeno, los programas génicos angiogénicos y metabólicos, la señalización eritropoyética y la adaptación redox. La pérdida o atenuación de la función de VHL estabiliza HIF-1α/HIF-2α, reconfigurando el flujo glucolítico y las vías de remodelación de la matriz extracelular, y alterando la expresión génica sensible a la hipoxia. Estos procesos se utilizan ampliamente para modelar la señalización de hipoxia, la reprogramación metabólica y las respuestas del microambiente relevantes para la tumorogénesis y la biología vascular en sistemas murinos.

Von Hippel Lindau/VHL El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Vhl en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Vhl. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Vhl. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Vhl alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.