Partículas Lentivirales de Activación (h) Vitamin D Receptor/VDR: sc-400171-LAC

VDR codifica el receptor de vitamina D, un receptor nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR y se une a elementos de respuesta a la vitamina D para regular programas de transcripción que controlan la homeostasis del calcio y del fosfato, la diferenciación epitelial y la modulación inmunitaria. La señalización de VDR se interconecta con la remodelación de la cromatina y el reclutamiento de correaguladores para definir la expresión génica específica de cada tipo celular, influyendo en la función de barrera, las respuestas de citocinas y las vías metabólicas. La actividad desregulada de VDR y la señalización de la vitamina D se han asociado con alteraciones de la señalización inflamatoria, trastornos óseos y minerales, y cambios en la biología tumoral en múltiples tejidos. Por ello, el VDR humano se estudia ampliamente en la regulación transcripcional, la endocrinología, la inmunología y el control epigenético de redes génicas.

Las partículas de activación lentiviral Vitamin D Receptor/VDR (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de VDR en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Vitamin D Receptor/VDR (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción VDR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Vitamin D Receptor/VDR. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo VDR y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.