Vitamin D Receptor/VDR Plasmide Double Nickase (m): sc-423664-NIC

Vdr codifica il recettore della vitamina D (VDR), un recettore nucleare attivato dal legando che eterodimerizza con RXR per regolare la trascrizione su elementi di risposta alla vitamina D e rimodellare gli stati della cromatina in diversi loci bersaglio. Nelle cellule murine, la segnalazione mediata da VDR integra l’omeostasi di calcio e fosfato con programmi cellulari che controllano la differenziazione, l’integrità della barriera e la modulazione immunitaria, e può intersecarsi con reti trascrizionali collegate a Wnt/β-catenina, NF-κB e MAPK. L’attività di Vdr influenza l’espressione genica di osteoblasti e osteoclasti, le giunzioni serrate epiteliali e le risposte antimicrobiche, nonché vie metaboliche sensibili a segnali endocrini. L’alterazione della trascrizione dipendente da Vdr è ampiamente studiata in modelli di disturbi ossei e del metabolismo minerale, fenotipi infiammatori e modificazioni dell’omeostasi epiteliale o metabolica.

Vitamin D Receptor/VDR Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Vdr nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Vdr. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Vdr. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Vdr interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.