VILL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423675

Descripción general

Vill codifica villin-like (VILL), una proteína del citoesqueleto de unión a actina enriquecida en contextos epiteliales, donde contribuye a la organización y remodelación de las redes de F-actina. Las proteínas de la superfamilia villina/gelsolina regulan el corte (severing), el empaquetamiento en haces y la estabilización de los filamentos de actina, conectando señales de calcio y fosfoinosítidos con cambios en la forma celular, la polaridad y la arquitectura asociada a la función de barrera. A través de estas funciones, VILL es relevante para vías que gobiernan la diferenciación epitelial, la organización de las microvellosidades y la remodelación dinámica de las uniones, que influyen en la homeostasis tisular. La dinámica de actina desregulada y la integridad estructural del epitelio se han implicado ampliamente en la inflamación, la disfunción de la barrera y la remodelación asociada a tumores, lo que convierte a Vill en un locus útil para estudios mecanísticos del control del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VILL (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vill en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vill junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vill tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VILL.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vill para la investigación de la señalización de VILL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Vill críticos para la función de VILL
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vill para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VILL CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VILL CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vill. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VILL (m) y el plásmido HDR VILL (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vill para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vill definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.