VILIP-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401100

Descripción general

VSNL1 codifica la proteína 1 similar a visinina (VILIP-1), un sensor neuronal de calcio de la familia EF-hand que experimenta cambios conformacionales dependientes de Ca2+ y asociación a membrana mediada por un “interruptor” de miristoilación. VILIP-1 acopla los transitorios intracelulares de calcio a la regulación de la transducción de señales, influyendo en vías vinculadas a cAMP/cGMP, la plasticidad sináptica, el crecimiento de neuritas y la expresión génica dependiente de la actividad. En tejidos humanos está enriquecida en el sistema nervioso y se utiliza comúnmente como marcador del estado neuronal y de la dinámica de la señalización por calcio. Las alteraciones en la expresión de VSNL1/VILIP-1 y en la homeostasis del calcio se han asociado con la biología de enfermedades neurodegenerativas y neuropsiquiátricas, lo que respalda estudios mecanísticos sobre la vulnerabilidad neuronal y las respuestas al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VILIP-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VSNL1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VSNL1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VSNL1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VILIP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VSNL1 para la investigación de la señalización de VILIP-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VSNL1 críticos para la función de VILIP-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VSNL1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VILIP-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VILIP-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VSNL1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VILIP-1 (h) y el plásmido HDR VILIP-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VSNL1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VSNL1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.