Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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VHR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405733
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- VHR El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico VHR, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VHR Anticuerpo (F-2): sc-374161
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
VHR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405733 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La fosfatasa de proteínas de doble especificidad 3 (DUSP3), también conocida como VHR, es una fosfatasa atípica de doble especificidad que desfosforila residuos de fosfotirosina y fosfoserina/treonina en quinasas MAP. VHR modula la dinámica de la señalización MAPK/ERK y contribuye al control de la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la terminación de la señal aguas abajo de estímulos relacionados con factores de crecimiento y señales inmunitarias. Al ajustar programas transcripcionales dependientes de la fosforilación, DUSP3 influye en los fenotipos de proliferación y diferenciación en células humanas. La actividad fosfatasa desregulada y el control alterado de la vía MAPK se implican con frecuencia en la biología del cáncer y en la señalización inflamatoria, lo que convierte a DUSP3 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la fosforregulación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO VHR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DUSP3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DUSP3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DUSP3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VHR.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DUSP3 para la investigación de la señalización de VHR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DUSP3 críticos para la función de VHR
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DUSP3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido VHR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VHR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DUSP3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VHR (h) y el plásmido HDR VHR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DUSP3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DUSP3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.