VE-cadherin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400063-ACT

CDH5 codifica la VE-caderina, una proteina delle giunzioni aderenti specifica dell’endotelio che media l’adesione cellula–cellula calcio-dipendente e mantiene l’integrità della barriera vascolare. La VE-caderina coordina il rimodellamento delle giunzioni con la segnalazione di VEGF, i programmi trascrizionali dipendenti dalla β-catenina e le vie delle piccole GTPasi che regolano polarità endoteliale, permeabilità e germogliamento angiogenico. Alterazioni della funzione o dell’espressione di CDH5 sono associate a disfunzione endoteliale, neovascolarizzazione patologica, perdita vascolare indotta dall’infiammazione e angiogenesi associata ai tumori, rendendolo un nodo chiave nella ricerca in biologia vascolare. In quanto marcatore canonico dell’identità endoteliale, la VE-caderina è comunemente utilizzata per studiare l’assemblaggio delle giunzioni, la meccanotrasduzione e i processi collegati alla transizione endotelio-mesenchimale.

VE-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VE-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VE-cadherin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VE-cadherin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VE-cadherin nelle cellule tumorali con espressione di CDH5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.