VE-cadherin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400063-ACT

CDH5 kodiert VE-Cadherin, ein endothelzellspezifisches Adhärenz­kontaktprotein, das calciumabhängige Zell-Zell-Adhäsion vermittelt und die Integrität der vaskulären Barriere aufrechterhält. VE-Cadherin koordiniert den Umbau von Zellkontakten mit der VEGF-Signalübertragung, β-Catenin-abhängigen Transkriptionsprogrammen und Signalwegen kleiner GTPasen, die endotheliale Polarität, Permeabilität und angiogenes Sprossen regulieren. Eine veränderte CDH5-Funktion oder -Expression wird mit endothelialer Dysfunktion, pathologischer Neovaskularisation, entzündungsbedingter vaskulärer Leckage und tumorassoziierter Angiogenese in Verbindung gebracht und macht CDH5 zu einem zentralen Knotenpunkt in der vaskulärbiologischen Forschung. Als kanonischer Marker der endothelialen Identität wird VE-Cadherin routinemäßig eingesetzt, um den Aufbau von Zellkontakten, Mechanotransduktion und Prozesse zu untersuchen, die mit der endothelial-mesenchymalen Transition verknüpft sind.

VE-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDH5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

VE-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDH5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDH5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen VE-cadherin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDH5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von VE-cadherin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des VE-cadherin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDH5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.