Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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VCP Double Nickase Plasmid (h): sc-401052-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das VCP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- VCP Double-Nickase-Plasmid (h) und VCP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf VCP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: VCP: sc-133212
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
VCP Double Nickase Plasmid (h) | sc-401052-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VCP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401052-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Valosin-haltige Protein (VCP/p97) ist eine AAA+-ATPase, die die Hydrolyse von ATP mit Proteinextraktions- und Remodeling-Prozessen in zahlreichen Proteostase‑Signalwegen koppelt. VCP koordiniert die ubiquitinabhängige Prozessierung von Substraten in der ER-assoziierten Degradation (ERAD), im Ubiquitin‑Proteasom‑System und in der selektiven Autophagie und trägt zudem zu chromatinassoziierten Prozessen sowie zur Regulation des Zellzyklus bei. Über Interaktionen mit Adapterproteinen hilft VCP, die Proteinhomöostase und Stressantworten aufrechtzuerhalten, und verknüpft seine Aktivität mit Signalwegen der mitochondrialen Qualitätskontrolle und der inflammatorischen Signalübertragung. Eine dysregulierte VCP‑Funktion sowie mutationsbedingte Störungen wurden mit multisystemischen Proteinopathie‑Phänotypen und Mechanismen neurodegenerativer Erkrankungen in Verbindung gebracht, wodurch VCP ein relevantes Ziel für die Untersuchung von proteotoxischem Stress und zellulären Qualitätskontrollnetzwerken darstellt.
VCP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des VCP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von VCP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die VCP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit VCP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.