vanin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423682

概要

Vnn1 は、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型のパントテイナーゼであるバニン-1をコードしており、パントテインを加水分解してパントテン酸（ビタミンB5）とシステアミンを産生することで、細胞外代謝とレドックスバランスを結び付けています。バニン-1の活性は、補酵素A（CoA）の恒常性、酸化ストレス応答、炎症性シグナル伝達に影響し、上皮バリアや免疫細胞と組織のクロストークにおいて重要な役割を担います。マウスモデルでは、Vnn1は白血球の動員、組織傷害応答、代謝性炎症の制御に関連付けられており、大腸炎、肝ストレス、心代謝表現型の研究において重要です。発現は環境ストレス因子に反応して変動することが多く、グルタチオン動態やサイトカイン産生を制御する経路を調節し得ます。

vanin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVnn1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vnn1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vnn1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、vanin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、vanin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vnn1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• vanin-1の機能に不可欠なVnn1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vnn1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• vanin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびvanin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vnn1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  vanin-1 HDRプラスミド（m）および vanin-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVnn1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVnn1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。