Plásmido Doble Nickase (h) VAC14: sc-408584-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)VAC14 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa VAC14 (h) y el plásmido de doble nickasa VAC14 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a VAC14. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VAC14 Anticuerpo (C-10): sc-271831
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) VAC14 | sc-408584-NIC | 20 µg | $410.00 |
VAC14 codifica un componente andamio del complejo PIKfyve–FIG4–VAC14 que regula el metabolismo de los fosfoinosítidos, en particular la interconversión de PI(3)P y PI(3,5)P2 en las membranas endolisosomales. Al controlar la homeostasis de PI(3,5)P2, VAC14 favorece la maduración de los endosomas, la función lisosomal, el flujo autofágico y los eventos de tráfico de membranas que mantienen la proteostasis celular. La alteración de la señalización dependiente de VAC14 perturba la morfología de vacuolas/lisosomas y las respuestas al estrés en neuronas y otros tipos celulares, lo que vincula esta vía con fenotipos neurodegenerativos y del neurodesarrollo descritos para defectos en el eje regulador de PI(3,5)P2. En consecuencia, VAC14 se estudia ampliamente en modelos de disfunción endolisosomal, mantenimiento axonal y respuestas celulares al estrés nutricional y osmótico.
VAC14 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus VAC14 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de VAC14. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de VAC14. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con VAC14 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.