VAC14 Plasmide Double Nickase (h): sc-408584-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VAC14 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il VAC14 Double Nickase Plasmid (h) e il VAC14 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VAC14. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VAC14 Antibody (C-10): sc-271831
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VAC14 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408584-NIC | 20 µg | $410.00 |
VAC14 codifica un componente di impalcatura (scaffold) del complesso PIKfyve–FIG4–VAC14, che regola il metabolismo dei fosfoinositidi, in particolare l’interconversione tra PI(3)P e PI(3,5)P2 sulle membrane endolisosomiali. Attraverso il controllo dell’omeostasi di PI(3,5)P2, VAC14 supporta la maturazione degli endosomi, la funzione dei lisosomi, il flusso autofagico e gli eventi di traffico di membrana che mantengono la proteostasi cellulare. L’alterazione della segnalazione dipendente da VAC14 perturba la morfologia dei vacuoli/lisosomi e le risposte allo stress nei neuroni e in altri tipi cellulari, collegando questa via ai fenotipi neurodegenerativi e neurosviluppativi riportati per difetti dell’asse regolatorio di PI(3,5)P2. Di conseguenza, VAC14 è ampiamente studiato in modelli di disfunzione endolisosomiale, mantenimento assonale e risposte cellulari allo stress nutritivo e osmotico.
VAC14 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VAC14 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VAC14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VAC14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VAC14 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.