Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase B1: sc-400926-NIC

ATP6V1B1 codifica la subunidad B1 del dominio V1 de la H+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa), una bomba de protones multisubunidad que impulsa la acidificación dependiente de ATP de los compartimentos intracelulares y de dominios especializados de la membrana plasmática. La actividad de la V-ATPasa sostiene el tráfico vesicular, el reciclaje de receptores, la degradación lisosomal, la maduración de endosomas y el procesamiento de proteínas dependiente del pH, lo que vincula a ATP6V1B1 con la homeostasis de los orgánulos y la fisiología del transporte epitelial. En los epitelios del riñón y del oído interno humanos, los complejos de V-ATPasa que contienen B1 contribuyen a la secreción transepitelial de protones y a la regulación del pH, integrándose con vías que controlan el equilibrio electrolítico y la homeostasis ácido-base. La desregulación o alteración genética de ATP6V1B1 se asocia con trastornos de la función tubular renal y de la audición, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos del transporte de protones y la fisiología epitelial.

V-ATPase B1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP6V1B1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP6V1B1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP6V1B1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP6V1B1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.