UXT CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403823-ACT

Humanes UXT (ubiquitously expressed transcript) kodiert ein kleines, überwiegend nukleäres Protein, das als transkriptioneller Ko‑Regulator und Gerüstprotein für Multiproteinkomplexe fungiert. UXT wurde mit der Kontrolle der NF‑κB‑abhängigen Genexpression und anderer Signalprogramme in Verbindung gebracht, indem es mit Transkriptionsfaktoren und chromatinassoziierten Komponenten interagiert; damit ist es an der Regulation von Zellzyklusprogression, Apoptose und Entzündungsreaktionen beteiligt. Indem UXT die transkriptionelle Ausgabe und die Stabilität von Proteinkomplexen beeinflusst, trägt es zur zellulären Homöostase bei und wird in der Literatur mit veränderten Signalzuständen assoziiert, wie sie in Krebs- sowie immunbezogenen Krankheitskontexten beobachtet werden. Diese Eigenschaften machen UXT zu einem nützlichen Knotenpunkt, um das Crosstalk zwischen Transkriptionsregulation und stressresponsiver Signalgebung zu untersuchen.

UXT Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UXT-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UXT Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UXT-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UXT-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UXT-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UXT-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UXT-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UXT-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UXT-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.