USP31 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429270-ACT

O gene Usp31 de camundongo codifica a USP31, uma enzima desubiquitinante que edita cadeias de ubiquitina para modular a estabilidade proteica e a duração dos sinais. A USP31 tem sido implicada na regulação de vias de sinalização inflamatórias e de resposta ao estresse, incluindo vias que convergem para o NF-κB e para programas transcricionais da imunidade inata. Ao remodelar a degradação dependente de ubiquitina de intermediários dessas vias, a USP31 pode influenciar a sobrevivência celular, as respostas de citocinas e a proteostase. A desregulação da sinalização por ubiquitina envolvendo desubiquitinases como a USP31 é frequentemente investigada em modelos de inflamação crônica, disfunção imunológica e redes de sinalização oncogênicas.

USP31 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Usp31 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP31 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Usp31 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Usp31, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP31. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Usp31 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP31 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP31 em células tumorais com expressão de Usp31 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.