Plasmide CRISPR d'Activation (m) USP25: sc-424423-ACT

La souris *Usp25* code l’ubiquitine‑spécifique peptidase 25 (USP25), une enzyme déubiquitinante qui modifie les chaînes d’ubiquitine afin de moduler la stabilité des protéines, leur trafic et la terminaison des signaux. L’activité d’USP25 influence la protéostasie et la signalisation inflammatoire, notamment la régulation des réponses de l’immunité innée liées à NF‑κB et aux voies associées aux interférons, via la déubiquitination de composants clés de signalisation. Dans des contextes neuronaux et immunitaires, la dose d’*Usp25* a été associée à des altérations de l’homéostasie synaptique et inflammatoire, ce qui soutient l’étude de ses rôles dans des phénotypes neurodéveloppementaux et la neuroinflammation. Une signalisation ubiquitine dérégulée impliquant USP25 a également été étudiée dans des situations de stress protéotoxique et de reprogrammation de la signalisation associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques au niveau des voies.

USP25 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Usp25 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP25 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Usp25 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Usp25, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP25. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Usp25 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP25 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP25 dans les cellules tumorales présentant une expression de Usp25 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.