USP18 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423988-ACT

Usp18 codifica per la peptidasi 18 specifica per l’ubiquitina (USP18), un’isopetidasi inducibile dagli interferoni che rimuove ISG15 dalle proteine coniugate e agisce come regolatore negativo chiave della segnalazione dell’interferone di tipo I. Modulando la dinamica dell’ISGilazione e attenuando l’output della via JAK–STAT tramite interazioni con il complesso recettoriale dell’interferone, USP18 plasma l’attivazione dell’immunità innata, le risposte antivirali e i programmi trascrizionali associati all’infiammazione. Nei sistemi murini, un’alterata attività di USP18 è collegata a una deregolazione dell’espressione dei geni stimolati dall’interferone e dell’omeostasi immunitaria, a supporto della sua rilevanza negli studi sulla biologia delle infezioni, l’autoimmunità e la segnalazione nel microambiente tumorale-immune.

USP18 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Usp18 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

USP18 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Usp18 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Usp18, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di USP18. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Usp18 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da USP18 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via USP18 nelle cellule tumorali con espressione di Usp18 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.