Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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USP14 Double Nickase Plasmid (h): sc-403167-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das USP14 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- USP14 Double-Nickase-Plasmid (h) und USP14 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf USP14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: USP14: sc-398009
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
USP14 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403167-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
USP14 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403167-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
USP14 kodiert eine ubiquitinspezifische Protease, die mit dem 26S-Proteasom assoziiert ist und Ubiquitinketten auf Substraten modifiziert, wodurch sie den proteasomalen Abbau und die Ubiquitin-Homöostase in menschlichen Zellen reguliert. Durch das Abspalten von Ubiquitin von konjugierten Proteinen beeinflusst USP14 die Proteinkontrolle (Protein-Qualitätskontrolle), zelluläre Stressantworten und Signalwege, die mit der Proteostase verknüpft sind, einschließlich Prozessen, die den Zellzyklus und die Apoptose beeinflussen. Eine veränderte USP14-Aktivität wurde im Zusammenhang mit gestörter Proteasomfunktion und aberranter Ubiquitin-Signalgebung untersucht – Mechanismen, die häufig in der Krebsbiologie und bei Neurodegeneration eine Rolle spielen. Als proteasomassoziierte Deubiquitinase ist USP14 zudem relevant, um zu untersuchen, wie Ubiquitin-Dynamiken die Antigenprozessierung und allgemein den immunbezogenen Proteinumsatz prägen.
USP14 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des USP14-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von USP14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die USP14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit USP14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.