Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO UROS (m): sc-423627
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- UROS Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique UROS, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UROS Antibody (A-8): sc-365877
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO UROS (m) | sc-423627 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Uros code l’uroporphyrinogène III synthase (UROS), une enzyme cytosolique de la voie de biosynthèse de l’hème qui convertit l’hydroxyméthylbilane en uroporphyrinogène III, le précurseur physiologique pour la production en aval de porphyrines et d’hème. Cette étape est essentielle pour maintenir la disponibilité cellulaire en hème, nécessaire à la respiration mitochondriale, au fonctionnement des cytochromes et à l’homéostasie redox. Une altération de l’activité d’UROS entraîne l’accumulation d’isomères de porphyrines non physiologiques et perturbe la maturation érythroïde ainsi que les réponses au stress oxydatif. Dans les modèles murins, Uros est couramment étudié pour explorer le métabolisme des porphyrines, l’érythropoïèse et les mécanismes reliant un déséquilibre de la voie de l’hème à la photosensibilité tissulaire et à des phénotypes associés à l’anémie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UROS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Uros dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Uros, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Uros à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UROS.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Uros pour l'étude de la signalisation de UROS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Uros essentiels à la fonction de UROS
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Uros pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le UROS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UROS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Uros. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le UROS plasmide HDR (m) et le UROS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Uros pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Uros définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.