UROS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423627

概要

Uros は、ヘム生合成経路に属する細胞質酵素ウロポルフィリノーゲンIII合成酵素（UROS）をコードしており、ヒドロキシメチルビランをウロポルフィリノーゲンIIIへ変換します。ウロポルフィリノーゲンIIIは、下流のポルフィリンおよびヘム産生における生理的前駆体です。この段階は、ミトコンドリア呼吸、シトクロム機能、ならびにレドックス恒常性に必要な細胞内ヘム利用可能性を維持するうえで不可欠です。UROS活性が障害されると、非生理的なポルフィリン異性体が蓄積し、赤芽球の成熟や酸化ストレス応答が攪乱されます。マウスモデルでは、Uros はポルフィリン代謝、造血（特に赤血球系分化）、そしてヘム経路の不均衡が組織の光過敏性や貧血関連表現型に結び付く機序を解明するために、一般的に研究されています。

UROS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUros遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Uros内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Urosのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UROSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UROSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Uros欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UROSの機能に不可欠なUrosエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Urosゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UROS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUROS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Uros遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UROS HDRプラスミド（m）および UROS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUrosホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUros標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。