Plásmido CRISPR de Activación (h) URB: sc-408597-ACT

CCDC80 codifica URB, una proteína asociada a la matriz extracelular y secretada, implicada en la remodelación del estroma, la adhesión célula–matriz y la regulación de la señalización de factores de crecimiento. URB se ha vinculado a vías que influyen en la adipogénesis, la homeostasis metabólica y el control dependiente del contexto de la proliferación y migración celulares, en consonancia con un papel en la organización tisular y la comunicación cruzada mesénquima–epitelio. Se han descrito alteraciones en la expresión de CCDC80 en múltiples contextos patológicos, incluidos fenotipos relacionados con la obesidad y cánceres, donde puede correlacionarse con cambios en la composición del microambiente tumoral y con el comportamiento invasivo. Estas características hacen de CCDC80 una diana útil para analizar redes de señalización extracelular, biología de la matriz y programas transcripcionales asociados a cambios de estado fenotípico.

URB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCDC80 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

URB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCDC80 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCDC80, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de URB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCDC80 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de URB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía URB en células tumorales con expresión de CCDC80 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.