UNCX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423613

Übersicht

Uncx kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor UNCX, einen nukleären, DNA-bindenden Regulator, der bei der Maus an der embryonalen Musterbildung und der Festlegung von Zellschicksalen beteiligt ist. Die UNCX-Aktivität trägt zu entwicklungsbezogenen genregulatorischen Netzwerken bei, die die neuronale Differenzierung und die Organisation somitenabgeleiteter Gewebe koordinieren, und greift dabei in Transkriptionsprogramme ein, die regionale Identität und Reifung steuern. Eine veränderte Uncx-Funktion wurde mit Defekten der axialen/somitischen Entwicklung und neuroentwicklungsbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht, wodurch es sich als geeigneter Knotenpunkt zur Untersuchung kongenitaler Phänotypen und der Lineage-Festlegung eignet. In experimentellen Systemen dient UNCX als Marker und Modulator von Differenzierungszuständen, in denen eine präzise transkriptionelle Kontrolle erforderlich ist.

Das UNCX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Uncx-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Uncx-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Uncx nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UNCX-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Uncx-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UNCX-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Uncx-Exone abzielen, die für die UNCX-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Uncx-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UNCX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UNCX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Uncx-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UNCX HDR-Plasmid (m) und UNCX HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Uncx-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Uncx-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.