UNC93B1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404369-ACT

UNC93B1 (UNC93-Homolog B1) ist ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das den Transport und die Signalkompetenz nukleinsäuresensierender Toll-like-Rezeptoren steuert, darunter TLR3, TLR7, TLR8 und TLR9. Indem UNC93B1 diese Rezeptoren als Chaperon vom ER in endolysosomale Kompartimente begleitet, trägt es dazu bei, die Aktivierungsschwelle für Typ-I-Interferon- und NF-κB-Signalwege nachgeschaltet auf pathogen- und schädigungsassoziierte Nukleinsäuren festzulegen. Eine veränderte UNC93B1-Funktion kann die angeborene Immunerkennung, die Zytokinproduktion und die Aktivierung antigenpräsentierender Zellen stören und wird daher mit Immundysregulation sowie einer erhöhten Anfälligkeit für infektionsgetriebene entzündliche Phänotypen in Verbindung gebracht. Als Regulator der endosomalen Kompartimentierung von TLRs wird UNC93B1 häufig in Monozyten, dendritischen Zellen, B-Zellen und epithelialen Modellen untersucht, um Schaltkreise der angeborenen Immunität zu analysieren.

UNC93B1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UNC93B1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UNC93B1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UNC93B1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UNC93B1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UNC93B1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UNC93B1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UNC93B1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UNC93B1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UNC93B1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.