UNC5H1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405369

Descripción general

UNC5A codifica el receptor de netrina UNC5H1, una molécula transmembrana de guía que dirige la navegación axonal y el posicionamiento neuronal mediante señalización dependiente de ligando. UNC5H1 participa en la integración de señales atractivas/repulsivas mediadas por netrina-1 y puede influir en la dinámica del citoesqueleto, la adhesión y el comportamiento migratorio a través de vías downstream vinculadas a las GTPasas de la familia Rho y a MAPK. Más allá del neurodesarrollo, la señalización asociada a UNC5H1 se ha relacionado con la regulación de la apoptosis y con programas celulares tipo transición epitelio-mesénquima, lo que respalda funciones en el patrón tisular y la homeostasis. Se ha descrito una expresión desregulada de UNC5A/UNC5H1 o un acoplamiento alterado de sus vías en estudios de trastornos del neurodesarrollo y de biología del cáncer, donde se utiliza como un nodo mecanístico para investigar el crosstalk entre guía axonal y supervivencia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UNC5H1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UNC5A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UNC5A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UNC5A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UNC5H1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UNC5A para la investigación de la señalización de UNC5H1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de UNC5A críticos para la función de UNC5H1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UNC5A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UNC5H1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido UNC5H1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UNC5A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UNC5H1 (h) y el plásmido HDR UNC5H1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UNC5A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UNC5A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.