UMPS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423609

Übersicht

Umps kodiert die Uridinmonophosphat-Synthetase (UMPS), ein bifunktionales Enzym, das die letzten Schritte der de-novo-Pyrimidinbiosynthese katalysiert, indem es Orotat über die Aktivitäten der Orotat-Phosphoribosyltransferase und der Orotidin-5′-phosphat-Decarboxylase zu UMP umsetzt. UMPS trägt zur Homöostase des Nukleotidpools bei, die für DNA-Replikation, RNA-Synthese und das Fortschreiten des Zellzyklus erforderlich ist, und verknüpft damit den Pyrimidinstoffwechsel mit Proliferationsfähigkeit und Genomstabilität. Eine Störung der UMPS-Funktion beeinflusst indirekt ein Kohlenstoff‑1‑ und folatgekoppeltes Stoffwechselnetzwerk, indem sich der Nukleotidbedarf verändert, und kann zelluläre Antworten auf Replikationsstress umformen. Eine Dysregulation der Pyrimidinsynthesewege ist breit relevant für Untersuchungen zu Mechanismen metabolischer Erkrankungen und proliferativen Phänotypen in Säugetiersystemen, einschließlich Mausmodellen.

Das UMPS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Umps-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Umps-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Umps nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UMPS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Umps-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UMPS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Umps-Exone abzielen, die für die UMPS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Umps-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UMPS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UMPS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Umps-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UMPS HDR-Plasmid (m) und UMPS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Umps-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Umps-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.